1,25(OH)2D3对NOD小鼠1型糖尿病的免疫干预及其机制研究

摘要

目的 观察1,25(OH)2D3对雌性非肥胖糖尿病(NOD)小鼠糖尿病发病率、胰岛炎的影响,以及外周免疫器官脾脏T淋巴细胞亚群的变化,血清细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)及一氧化氮(NO)的水平,从而更好地揭示1,25(OH)2D3的免疫调节机制.方法 离乳(21 d龄)的雌性NOD小鼠(80只)随机分为两组:第1组给予1,25(OH)2D3(5μg/kg)隔日1次腹腔注射,共7周,作为实验组.第2组给予等量花生油作为对照组(40只),给药时间、方法同前.10周龄时腹腔注射环磷酰胺以加速糖尿病.加速1周后各取15只通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测IFN-γ、IL-4水平,生化比色法检测NO水平,流式细胞仪分析脾组织T细胞亚群的变化.其余继续观察.小鼠在被确诊糖尿病或环磷酰胺加速后1个月处死,观察胰腺病理变化、糖尿病发病率及血钙水平.结果 实验组发病率(12%)明显低于对照组(56%),P＜0.01;实验组胰岛炎症分数较对照组明显降低P＜0.01,炎症程度也明显减轻;实验组血清IL-4较对照组明显升高[(52±9)ng/L vs(33±3)ng/L],P＜0.01;IFN-γ、NO较对照组显著降低[(71±16)ng/L vs(141±11)ng/L,(78±28)ng/L vs(118±19)ng/L],P均＜0.01;脾脏淋巴细胞经流式细胞仪测定,结果显示实验组T细胞CD4+、CD8+亚群较对照组显著升高,CD4+亚群为47±6与35±4(P＜0.01),CD8+亚群为11.6±3.6与7.8±1.5(P＜0.05),而CD4+/CD8+亚群分别为4.3±0.9与4.6±0.9(P＞0.05),两组差异无统计学意义;实验组血钙较对照组稍高,但NOD小鼠可以很好耐受.结论 1,25(OH)2D3可以预防环磷酰胺加速的NOD小鼠糖尿病的发生,并可减轻胰岛炎.其机制:①可能与增加Th2型细胞因子的全身表达,降低Th1型细胞因子的全身表达,从而调节Th1/Th2型细胞因子比例失衡有关.②可能与增加抑制性T细胞数目,促进CD4+T细胞由Th1向Th2亚群转化有关.该实验同时证实了NO在糖尿病的发生机制中起一定作用.