LncRNA KCNQ1OT1降表达对顺铂耐药卵巢癌细胞耐药性的影响及其作用机制

摘要

目的观察长链非编码RNA(LncRNA)KCNQ1OT1降表达对顺铂(DDP)耐药卵巢癌细胞耐药性的影响并分析其作用机制。方法选用SKOV-3人卵巢癌细胞,经DDP反复间歇冲击诱导法构建DDP耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP;以不同浓度DDP作用SKOV3、SKOV3/DDP细胞,CCK-8法检测细胞增殖情况得到50%细胞生长的药物浓度(IC50)并计算SKOV3/DDP细胞耐药指数(RI);采用qRT-PCR法检测SKOV-3、SKOV3/DDP细胞中的KCNQ1OT1。将SKOV3/DDP细胞分为三组,KCNQ1OT1降表达组和转染对照组中分别转染KCNQ1OT1 siRNA、NC-siRNA 48 h,对照组不转染,采用qRT-PCR法检测KCNQ1OT1观察转染效果;以不同浓度DDP作用各组细胞,以CCK-8法检测细胞增殖情况得到IC50并计算RI观察耐药性变化;取转染后的三组细胞,采用流式细胞术检测细胞周期,Western blotting法检测细胞p-AKT、p-mTOR蛋白。结果DDP对SKOV-3、SKOV-3/DDP细胞IC50分别为1.224、4.920μg/mL,SKOV-3/DDP细胞RI为4.020。与SKOV-3细胞比较,SKOV-3/DDP细胞KCNQ1OT1表达量增高(P<0.05)。KCNQ1OT1降表达组细胞中KCNQ1OT1表达量均低于转染对照组及对照组(P均<0.05),转染对照组与对照组间差异无统计学意义。随DDP浓度增加,各组细胞增殖抑制率均升高(P均<0.05);在相同DDP浓度下,KCNQ1OT1降表达组细胞增殖抑制率均高于转染对照组和对照组(P均<0.05)。DDP对KCNQ1OT1降表达组细胞IC50为3.613μg/mL,RI为0.734;DDP对转染对照组、对照组细胞IC50分别为9.737、8.461μg/mL,RI分别为1.979、1.720。与转染对照组和对照组比较,KCNQ1OT1降表达组G0/G1期细胞比例、p-mTOR蛋白表达量升高,S期和G2/M期细胞比例、p-AKT蛋白表达量降低(P均<0.05);转染对照组与对照组各期细胞比例及p-AKT、p-mTOR蛋白表达量差异均无统计学意义。结论干扰KCNQ1OT1表达可有效逆转卵巢癌细胞对DDP的耐药,其机制可能与阻滞耐药细胞于G0/G1期并调控AKT/mTOR信号通路活性有关。