异土木香内酯对人膀胱癌细胞株T24增殖、凋亡的影响及其机制

摘要

目的 观察异土木香内酯对人膀胱癌细胞株T24增殖、凋亡的影响,并探讨其可能作用机制.方法 ①取对数生长期T24细胞,分为1、2、3、4、5、6组,1～5组(实验组)分别加入5、10、20、40、80μmol/L的异土木香内酯,6组加入正常培养液(对照),分别于培养24、48、72 h时采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力.②T24细胞分成A、B、C、D、E组,A组加入不含异土木香内酯的培养液培养,B、E组先加入5 nmol/L的N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理培养2h,C、D、E组分别加入10、20、20 μmol/L的异土木香内酯,培养24 h时采用流式细胞仪测算各组细胞凋亡率,DCFH-DA试剂盒检测细胞内活性氧簇(ROS),JC-1线粒体膜电位试剂盒检测细胞线粒体膜电位.③取T24细胞分为4组,每组6个复孔,其中3组分别加入10、20、40 μmol/L异土木香内酯,另外一组加入不含异土木香内酯的培养液处理(对照组),培养24h时Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞色素C(Cytochrome C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3).结果 ①与1组比较,2、3、4、5组细胞增殖抑制率升高(P均＜0.05);与2组比较,3、4、5组细胞增殖抑制率升高(P均＜0.05);与3组比较,4、5组细胞增殖抑制率升高(P均＜0.05).②与A组比较,C、D组细胞凋亡率、ROS含量升高(P均＜0.05);与C组比较,D组细胞凋亡率、ROS含量升高(P均＜0.05);与D组比较,E组细胞凋亡率、ROS含量降低(P均＜0.05).与A组比较,C组细胞线粒体膜电位降低(P均＜0.05);与C组比较,D组细胞线粒体膜电位降低(P均＜0.05);与D组比较,E组细胞线粒体膜电位升高(P均＜0.05).③与对照组比较,各浓度药物组中Bax、Cytochrome C及Caspase-3相对表达量升高,Bcl-2相对表达量降低(P均＜0.05);随浓度升高,药物组Bax、Cytochrome C及Caspase-3相对表达量升高,Bcl-2相对表达量降低(P均＜0.05).结论 异土木香内酯可抑制T24细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与异土木香内酯导致ROS含量升高、线粒体膜电位下降、调节相关凋亡蛋白的表达有关.