二甲双胍对肝癌细胞凋亡及PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响

摘要

目的 观察二甲双胍对肝癌细胞凋亡的影响,并探讨该作用与PI3K/AKT/mTOR信号通路的关系.方法 体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,分别加入5、10、20、40、80 mmol/L二甲双胍,另设对照组,加入同体积的培养基培养24、48 h,MTT法检测各组细胞增殖情况,计算细胞存活率和半数抑制浓度(IC50),筛选出适合的药物浓度(5、10、20 mmol/L)和作用时间(48 h)进行后续实验.将SMMC-7721细胞分为二甲双胍组和对照组,二甲双胍组分别加入5、10、20 mmol/L二甲双胍处理48 h,对照组加入同体积的培养基.采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白p-AKT、p-mTOR表达.结果 5、10、20、40、80 mmol/L二甲双胍组处理24 h和48 h后,细胞存活率均低于对照组(P<0.05或P<0.01);二甲双胍能够抑制细胞增殖,24 h和48 h的IC50分别为36.05、25.76 mmol/L,后续选择5、10、20 mmol/L二甲双胍处理肝癌细胞48 h.不同浓度二甲双胍组细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05或P<0.01).与对照组相比,二甲双胍组5 mmol/L作用后Bax蛋白表达水平无统计学差异,10、20 mmol/L作用后Bax蛋白表达水平升高(P<0.05或<0.01);二甲双胍组各浓度作用后Bcl-2蛋白表达水平均降低,Bcl-2/Bax降低(P<0.05或P<0.01).p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平较对照组降低(P<0.05或P<0.01).结论 二甲双胍能够抑制肝癌细胞增殖、促进其凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路激活有关.