miR-16-5p、IRAK2基因对关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响及其机制

摘要

cqvip:目的观察miR-16-5p、IRAK2基因对脂多糖(LPS)诱导的胎鼠骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法剪取胎鼠膝关节获取软骨细胞,常规传代培养。通过靶基因预测网站starBase预测miR-16-5p靶基因,采用荧光素酶报告基因实验进行验证。取对数生长期软骨细胞分成8组。LPS组加入LPS诱导骨关节炎软骨细胞模型,NC组加入等量培养基;LPS+miR-16-5p组转染miR-16-5p模拟物(miR-16-5p mimics)后加入LPS,LPS+miR-con组转染对照模拟物(miR-con)后加入LPS;LPS+si-IRAK2组转染IRAK2 siRNA(si-IRAK2)后加入LPS,LPS+si-con组转染对照siRNA(si-con)后加入LPS;LPS+miR-16-5p+pcDNA-IRAK2组转染miR-16-5p mimics、IRAK2过表达质粒(pcDNA-IRAK2)后加入LPS,LPS+miR-16-5p+pcDNA-con组转染miR-16-5p mimics、对照质粒(pcDNA-con)后加入LPS。采用qRT-PCR法检测NC组、LPS组细胞中miR-16-5p、IRAK2 mRNA;采用MTT法测算各组细胞增殖能力(以细胞存活率表示细胞增殖能力);采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率;采用Western Blotting法检测各组细胞中IRAK2、细胞周期蛋白1(CyclinD1)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白。结果LPS组细胞中miR-16-5p、IRAK2 mRNA的相对表达量分别为1.00±0.10、4.01±0.41,NC组分别为5.33±0.53、0.85±0.09,两组相比,P均<0.05。LPS组、NC组细胞存活率分别为63.03%±6.31%、100.00%±10.26%,LPS+miR-16-5p组、LPS+miR-con组分别为93.16%±9.32%、65.46%±6.53%,LPS+si-IRAK2组、LPS+si-con组分别为91.46%±9.15%、60.45%±6.05%,LPS+miR-16-5p+pcDNA-IRAK2组、LPS+miR-16-5p+pcDNA-con组分别为68.08%±6.81%、93.16%±9.31%,两组间相比,P均<0.05。LPS组、NC组细胞凋亡率分别为28.46%±2.85%、1.59%±0.16%,LPS+miR-16-5p组、LPS+miR-con组分别为5.09%±0.51%、30.01%±3.02%,LPS+si-IRAK2组、LPS+si-con组分别为4.88%±0.50%、29.10%±2.91%,LPS+miR-16-5p+pcDNA-IRAK2组、LPS+miR-16-5p+pcDNA-con组分别为20.89%±2.10%、6.15%±0.62%,两组间相比,P均<0.05。LPS组细胞中IRAK2、CyclinD1、Bax、Bcl-2蛋白相对表达量分别为1.20±0.12、0.40±0.04、0.90±0.09、0.25±0.03,NC组分别为0.35±0.05、1.00±0.10、0.10±0.02、0.85±0.09,两组相比,P均<0.05;LPS+miR-16-5p组分别为0.90±0.09、0.28±0.03、0.75±0.08、0.10±0.02,LPS+miR-con组分别为0.42±0.05、0.92±0.09、0.30±0.05、0.88±0.08,两组相比,P均<0.05;LPS+si-IRAK2组分别为0.55±0.06、0.92±0.09、0.30±0.03、0.80±0.08,LPS+si-con组分别为1.20±0.12、0.42±0.05、0.90±0.09、0.32±0.05,两组相比,P均<0.05;LPS+miR-16-5p+pcDNA-IRAK2组分别为1.10±0.10、0.55±0.05、0.80±0.08、0.42±0.05,LPS+miR-16-5p+pcDNA-con组分别为0.52±0.05、0.92±0.09、0.32±0.05、0.84±0.05,两组相比,P均<0.05。结论LPS诱导的胎鼠骨关节炎软骨细胞中miR-16-5p低表达、IRAK2高表达,上调miR-16-5p表达、下调IRAK2基因表达均可促进软骨细胞增殖、抑制细胞凋亡,其作用机制可能与CyclinD1、Bax、Bcl-2蛋白表达有关。