CRP基因沉默后心肌细胞系H9c2的miR-21及其靶基因表达、细胞活力观察

摘要

目的 观察沉默炎症因子CRP基因对H9c2心肌细胞活力的影响,并探讨其机制.方法 ①取H9c2心肌细胞,随机分为CRP沉默组和对照组.CRP沉默组转染对CRP特异性沉默的pLV-shRNA-CRP慢病毒,对照组转染无敲减作用的pLV-shRNA-Scramble慢病毒.筛选与鉴定慢病毒载体成功转染H9c2心肌细胞.转染48 h后,采用实时定量PCR法观察两组H-19c2心肌细胞CRP基因的沉默效率、miR-21及PDCD4、PTEN、Spry1 mRNA.②取H9c2心肌细胞,随机分为空白组、对照组和CRP沉默组,空白组不转染病毒加入等量的DMEM培养基,对照组转染pLV-shRNA-Scramble慢病毒颗粒,CRP沉默组转染pLV-shRNA-CRP慢病毒颗粒.转染24h后,采用MTT法检测三组H9c2心肌细胞活力.结果 ①CRP沉默组和对照组H9c2心肌细胞中CRP mRNA相对表达量分别为0.320±0.069、1±0.090,miR-21相对表达量分别为0.740±0.099、0.280±0.010,两组相比P均＜0.01.CRP沉默组PDCD4、PTEN和Spry1 mRNA表达均低于对照组(P均＜0.01).②CRP沉默组、对照组和空白组细胞活力分别为0.78±0.030、0.66 +0.010、1.00±0.013;与空白组相比,CRP沉默组和对照组细胞活力均下降(P均＜0.01);与对照组相比,CRP沉默组细胞活力上升(P＜0.05).结论 沉默CRP基因可促进H9c2心肌细胞存活,这可能与其可增加H9c2心肌细胞中miR-21表达,抑制PDCD4、PTEN和Spry1的基因表达有关.