肝内胆管癌hTR反义RNA及锤头状核酶基因真核表达载体的构建

摘要

用反转录PCR法,调取肝内胆管癌细胞内的端粒酶RNA(hTR)基因,并针对其序列设计反义RNA封闭基因及锤头状核酶切割基因序列,将其构建入真核表达载体pTriEx-4内.根据hTR cDNA序列设计引物,经RT-PCR法从体外培养的肝内胆管癌细胞内调取hTR模板区基因,根据其测序结果,合成反义RNA基因及核酶基因,与经相应酶切的真核表达载体连接,酶切鉴定重组体的正确性.经RT-PCR从细胞内调出68bp序列,与hTR cDNA比较,与模板区域碱基序列一致,反义RNA与核酶基因重组子经酶切鉴定序列正确.肝内胆管癌细胞内端粒酶的活性明显增高,RT-PCR法可调出其hTR基因有效片段;成功构建了针对hTR模板区的反义RNA基因和核酶基因的真核表达载体.