survivin基因靶向RNAi慢病毒载体的构建及意义

摘要

利用sidirect设计干扰stirvivin基因靶序列,合成回文DNA序列退火后克隆至vshRNA载体,双酶切电泳鉴定和测序分析及阳性克隆质粒抽提,慢病毒质粒DNA再转染293T细胞产生病毒,测定病毒滴度.转染A549细胞株,采用逆转录RT-PCR测定不同分组A549细胞中survivin mRNA.vshRNA载体经双酶切电泳鉴定和DNA测序分析,证实插入序列与原序列一致,位置正确.靶向survivin基因的siRNA可以有效抑制survivin基因的表达,RNAi抑制效率＞90%.认为survivin基因的表达siRNA慢病毒载体的构建成功,为研究肺癌分子病因和基因治疗提供依据,为研究高表达Buryivin的其他肿瘤构建了新的平台.