全骨髓贴壁法体外分离培养兔骨髓间充质干细胞

摘要

目的：采用全骨髓贴壁法体外分离培养兔骨髓间充质干细胞（BMSCs），并进行成骨、脂肪细胞诱导分化及鉴定。方法采用全骨髓贴壁法分离培养兔BMSCs ，倒置显微镜下观察细胞的形态及生长状况；分别绘制BM-SCs的生长曲线及贴壁率曲线，检测细胞活性；诱导细胞向脂肪及成骨细胞方向分化，检测细胞的多向分化潜能。结果分离培养的原代BMSCs 24 h出现贴壁现象，6 d后出现明显的集落生长，传代后细胞呈长梭形，形态均一，纯度高。 P3代细胞培养2 h贴壁30％以上，4 h贴壁60％，8 h贴壁70％以上，12 h贴壁90％。细胞生长曲线呈S形，显示细胞分别在第2、3、8天进入潜伏期、对数期、平台期。加入成骨及脂肪细胞诱导剂后，细胞碱性磷酸酶及油红O染色均阳性，表现出成骨及脂肪细胞的生物学特征。结论全骨髓贴壁法分离培养获得的细胞纯度较高，活性较强，增殖快，且具有BMSCs的一般生物学特性，此方法可以作为组织工程获取BMSCs的一种常用方法。