小鼠腹腔巨噬细胞模型的优化及其在中药复方筛选中的应用

摘要

目的:优化巨噬细胞(Mφ)筛选模型,并应用于四物汤等6个促吞噬组分的筛选.方法:以小鼠腹腔Mφ吞噬中性红的能力作为模型检测指标,考察细胞收集方法、细胞浓度、贴壁孵育时间、培养时间、LPS刺激浓度、中性红浓度、检测波长等因素对检测结果的影响,优化中性红法检测Mφ吞噬功能的实验条件,并用于四物汤等6个复方总多糖中促吞噬活性成分的筛选.结果:本实验条件下,PBS等三种清洗液收集小鼠腹腔Mφ的效率没有显著性差异(P＞0.05);Mφ贴壁孵育时间以3h为宜;Mφ加样浓度可选择在2～8×106/ ml范围内;LPS在30μg/ml时达到最佳刺激效应;中性红浓度选择0.09%能够满足检测要求;加入中性红后的反应时间以3h的OD值最高;检测波长以520nm时OD值最高.四物汤、四君子汤、六味地黄汤多糖组Mφ吞噬中性红的能力明显高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论:优化中性红法检测Mφ吞噬功能,对筛选中药免疫活性成分具有实用意义.