库尔勒香梨脉黄病毒RT-PCR检测技术研究

摘要

以库尔勒香梨叶片和皮层为材料,对总RNA提取方法进行了研究,从中筛选出了适合库尔勒香梨总RNA的提取方法.结果表明,要获得良好的RT-PCR扩增,RT体系中dNTPs浓度、互补引物、AMV、模板的浓度要分别达到0.1 mmol@L-1、0.2μmol@L-1、0.05U@μl-1、0.01μg@μl-1以上.此外,使用RNasin能有效抑制RT体系中RNase对病毒RNA的降解作用,可使RT过程顺利进行;PCR体系中dNTPs浓度至少要达到0 1 mmol@L-1,0 2～0.3 mmol@L-1可以获得最佳的扩增效果;Taq E浓度要达到0.015U@μl-1以上;引物浓度适宜范围0.3～0.7 μmol@L-1;Mg2+要达到1.26 mmol@L-1以上.