食品中金黄色葡萄球菌DNA环介导恒温扩增快速检测方法的建立与应用

摘要

[目的]金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌,主要经食品传播,引起食物中毒、组织及器官的化脓性炎症,建立快速,准确的检测方法对预防和控制金黄色葡萄球菌的传染具有重要意义.[方法] DNA 环介导恒温扩增(100p-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新颖的快速、高灵敏核酸扩增技术,本研究利用该技术建立金黄色葡萄球菌LAMP检测方法.基于金黄色葡萄球菌高度保守的Sa442基因序列,设计4条特异性LAMP扩增引物,两条外引物F3和B3及两条内引物FIP和BIP,在Bst DNA Polymerase作用下,65℃恒温水浴中,对26个种类共45株细菌进行扩增,所试的20株金黄色葡萄球菌均为LAMP阳性,说明所设计的LAMP 引物具有高度特异性.[结果]本LAMP方法对纯培养的金黄色葡萄球菌检测灵敏度为25 CFU/mL,对污染食品中 金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为42 CFIJ/g,40-60 min内即可完成检测.检验检疫实践证明,利用本LAMP方法 对958份肉类、蛋奶及其制品、人工污染样品等进行检测,检出115份LAMP阳性,与国标法(GB)检测结果一致.[结论]本LAMP方法操作简便、特异性强,灵敏度高,具有良好的实用性.