湖羊羔皮毛囊候选miRNA在不同花纹间的表达与毛囊发育特性关联的研究

摘要

[目的]通过前期高通量测序技术结合生物信息学分析研究湖羊大花、中花和小花羔皮毛囊间miRNA的差异表达,筛选出了14个候选miRNA,现进一步研究14个候选miRNA在不同花纹组间的表达量与毛囊各指标的相关性,以了解候选miRNA与毛囊发育特性间的关联,筛选用于后期功能验证的miRNA.[方法]利用高通量测序技术筛选湖羊大花、中花、小花不同花纹羔皮毛囊中的差异表达miRNA.利用与高通量测序同一批样品所提取的RNA进行RT-RCR验证,随机选取高通量测序结果中的5个差异表达miRNA,验证高通量测序结果的可靠性.通过荧光定量PCR技术检测14个候选miRNA在不同组别间的表达量,制作不同花纹羔皮组织的石蜡切片以评估不同毛囊的结构,并结合组织学观察与显微观测技术,采用SPSS 17.0分析14个候选miRNA的表达水平与毛囊组织学性质的相关性.[结果]湖羊毛囊成群分布,以3毛囊群的居多,直径较大的为中心初级毛囊,直径较小的为侧部次级毛囊.在显微镜相同视野中,湖羊大花、中花和小花3种不同类型花纹羔皮的初级毛囊数差异不显著(P＞0.05),小花组的次级毛囊数多于大花组和中花组的次级毛囊数且差异极显著(P＜ 0.01),中花组与小花组二者次级毛囊数相仿,差异不显著(P＞0.05),在相同的单位面积中,小花的毛囊总数要高于大花组和中花组;大花组的初级毛囊直径比中花组和小花组的初级毛囊直径要大的多,与中花组和小花组的初级毛囊直径差异极显著(P＜0.01),大花组的次级毛囊直径也比中花组、小花组的次级毛囊直径大,同时也与二者均呈极显著差异(P＜0.01),中花组和小花组二者的初级毛囊直径以及次级毛囊直径均差异不显著(P＞ 0.05);在已知的miRNA中,miRNA-143在大花组中的表达量与小花组差异极显著(P＜0.01),miRNA-10a在小花组的表达量与大花和中花组差异显著(P＜ 0.05),let-7i在大花组的表达量与中花组差异显著(P＜0.05);在测序新预测的差异miRNA中,NW_004080184.1_6326在中花组的表达量与大花组差异显著(P＜0.05)、与小花组差异极显著(P＜ 0.01),NW_004080165.1_8572在中花组的表达量与大花组和小花组差异极显著(P＜0.01),NW_004080181.1_3961在中花组的表达量与小花组差异极显著(P＜0.01),NW_004080190.1_13733在中花组的表达量与大花组差异极显著(P＜ 0.01),其余miRNA在大、中、小花中的表达差异不显著.14个miRNA的相对表达量均与毛囊部分指标存在相关性,表明I4个miRNA均有可能参与毛囊的生长发育.[结论] miRNA-143、miRNA-10a、let-7i、NW_004080184.1_6326、NW_004080165.1_8572、NW_004080181.1_3961以及NW_004080190.1_13733等7个miRNA可作为对湖羊羔皮毛囊发育具有重要影响的候选miRNA,在后续试验中将进一步验证.