基于蛋白结合抑制转录的纳米机器实现小分子蛋白质相互作用的无标记均相荧光检测

摘要

小分子与蛋白质之间相互作用的定量分析是化学遗传学、分子诊断学及药物筛选等领域的核心问题.我们通过将T7RNA聚合酶组装到小分子标记的DNA双链上,构建了一种RNA转录纳米机器.蛋白质与双链标记小分子的结合可定量抑制该机器的RNA转录活性,从而为小分子与蛋白质相互作用研究提供了一种可能的途径.基于这一发现,我们发展了一种新型均相无标记方法用于研究小分子及其蛋白质受体之间的相互作用,并使用生物素等三种小分子及其蛋白质受体用于验证该方法的可行性.实验结果表明在0.5到64nM范围内,该方法具有较好的动态响应,检测下限为0.2nM.由于方法采用了无标记、均相的荧光检测平台,除具有较高的灵敏度以外,该技术还具备稳健、低成本和易于自动化等优势,意味着该方法为发展稳健、高灵敏度和高特异性的均相蛋白质检测平台提供了新的思路.