结核分支杆菌HSP65 DNA疫苗的制备和重组蛋白的原核表达

摘要

结核分支杆菌分子量为65 ku的热应激蛋白(HSP65)是一种非常重要的抗原,为了研制结核病核酸疫苗,构建编码HSP65 DNA,并将其分别克隆到原核和真核载体中进行了表达.以标准结核分支杆菌H37Rv基因组DNA为模板,用PCR法扩增出HSP65基因,经限制性内切酶消化后,插入真核表达载体pJW4303中,获得重组质粒pJW-HSP65.同时将HSP65基因插入原核表达载体pET-22b(+),获得重组质粒pET22b-HSP65.将pET22b-HSP65重组质粒转化大肠杆菌蛋白酶缺陷型菌株BL21(DE3)/PolysS,用IPTG诱导,进行蛋白表达.结果表明,经酶切鉴定和序列测定证实插入片断为目的基因HSP65,构建成功了真核重组质粒pJW-HSP65即可作为结核病DNA疫苗.经SDS-PAGE检验证明可以在大肠杆菌细胞中高效表达,将表达蛋白进行纯化,作为保护性结核杆菌抗原以便检测HSP65 DNA疫苗的免疫效果.