在线固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定尿液中芬太尼及其代谢物的含量

摘要

建立了在线固相萃取(on-line SPE)-超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)测定尿液中芬太尼及其代谢物去甲芬太尼的方法,并将该方法运用于大鼠尿液中芬太尼及其代谢物的检测时限研究。将尿液用pH 9.2的2 mmol·L^(-1)甲酸铵溶液稀释,离心后直接进样。采用Oasis HLB固相萃取小柱通过在线固相萃取富集净化目标物,用pH 9.2的2 mmol·L^(-1)甲酸铵溶液淋洗,以分析泵的初始流动相将目标物洗脱至Hypesil GOLD C_(18)分析柱上,以不同体积比的含有2 mmol·L^(-1)甲酸铵和0.1%(体积分数)甲酸的甲醇溶液、含有2 mmol·L^(-1)甲酸铵和0.1%(体积分数)甲酸的水溶液的混合液为流动相进行梯度洗脱。串联质谱分析中采用电喷雾正离子源(ESI+)和选择离子监测(SRM)模式检测。将芬太尼以20μg·kg^(-1)的给药剂量对大鼠尾静脉注射后进行尿液收集,考察原体和代谢物的检测时限。结果表明:芬太尼和去甲芬太尼的质量浓度在2.0~800 ng·L^(-1)内与其峰面积呈线性关系,检出限均为0.200 ng·L^(-1),测定值的相对标准偏差(n=5)均小于15%。在大鼠尿液中芬太尼原体的检测时限为5~7 d,而其代谢物去甲芬太尼的检测时限长达28 d。