PCR-RFLP法鉴别罗布麻与混淆品白麻及其psbA-trnH序列分析

摘要

目的:基于叶绿体psbA-trnH基因间隔区序列,建立一种PCR-RFLP(聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性)方法鉴别罗布麻(Apocynum venetum L.)及其混淆品白麻(Apocynum pictum),并验证psbA-trnH序列酶切位点种间特异性和种内保守性.方法:将罗布麻和白麻提取总DNA,扩增psbA-trnH序列,扩增产物双向测序.序列分析发现,罗布麻含有特异性酶切位点SspⅠ.结果:扩增产物psbA-trnH为300～400 bp.罗布麻psbA-trnH产物均可以被SspⅠ酶切成两条条带,白麻却不能被SspⅠ酶切.生物信息分析结果表明,在罗布麻属中,罗布麻psbA-trnH序列的SspⅠ酶切位点具有种间特异性和种内保守性,在夹竹桃族进化树中,罗布麻与白麻距离最近.结论:本实验建立的PCR-RFLP方法可以有效鉴别罗布麻和白麻.