层状氢氧化氨基苯甲酸锌固定化辣根过氧化物酶及其催化性质

摘要

利用层状氢氧化氨基苯甲酸锌对辣根过氧化物酶(HRP)进行固定化实验,通过紫外分析探讨了固定化效果与HRP质量浓度、体系pH的关系.利用Lineweaver-Burk双倒数做图法测定了固定化HRP的动力学常数,考察了固定化HRP的储存稳定性和重复利用性.实验结果表明,在体系pH=8.0、HRP质量浓度为1.0 mg/mL的条件下,层状氢氧化氨基苯甲酸锌对HRP的饱和固载量为100 mg/g,最大比活力为60.27 U/mg.固定化HRP的米氏常数(Km)、催化常数(Kcat)、酶活性(X)分别为3.23 mmol/L,42.5 s-1,57.5 U/mg.与游离HRP相比,固定化HRP的k提高了44.2％,Kat下降了74.0％,X值下降了74.4％.储存40 d后,固定化HRP的活性为游离HRP的5.35倍.循环利用8次后,固定化HRP的活性保留率仍为79.6％.