利用脊柱骨来源骨髓细胞建立急性移植物抗宿主病模型

摘要

目的 探讨利用脊柱骨来源骨髓细胞建立小鼠异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,Allo-HSCT)急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型的可行性.方法 选择C57BL/6(H-2b)雄性小鼠为供体鼠,BALB/c(H-2d)雌性小鼠为受体鼠.制备供体鼠的脾细胞和脊柱骨来源骨髓细胞悬液.受体鼠采用药物加小剂量辐照的预处理方式,于移植前8 d～移植前4 d腹腔注射氟达拉滨(200 mg/kg),接着移植前3 d～移植前1 d腹腔注射环磷酰胺(60 mg/kg),最后在移植前进行全身照射(total-body irradiation,TBI),照射剂量为4 Gy(戈瑞).18只受体鼠经预处理后随机分为3组,每组6只:(1)骨髓移植组,只输入1×107个脊柱骨来源骨髓细胞;(2)aGVHD组,输注1×107个脊柱骨来源骨髓细胞和5×106个脾细胞,建立aGVHD模型;(3)空白对照组,不输入任何细胞.观察3组小鼠生存状态及存活率,取aGVHD组与骨髓移植组存活21 d的受体鼠进行病理学检查,取aGVHD组移植后21～28 d存活的小鼠的脾脏进行流式细胞术检测骨髓细胞嵌合度.结果 骨髓移植组小鼠全部存活,可重建造血,单纯输注骨髓细胞不会诱发aGVHD.aGVHD组小鼠出现aGVHD表现,100%发生aGVHD相关死亡,中位生存期为18 d;病理检查结果 显示符合aGVHD病理表现,移植后21～28 d存活的小鼠诊断为供受体混合嵌合状态,符合aGVHD诊断标准.结论 用脊柱骨来源骨髓建立的aGVHD模型完全符合标准,且更加经济,适合大规模建模.