雷帕霉素对小鼠腭突细胞生物学特性的影响

摘要

目的:研究雷帕霉素对小鼠腭突细胞(MEPCs)生物学特性的影响.方法:取胎龄13.5天的小鼠,分离培养MEPCs,加入不同浓度(0、5、10、50、100 nmol/L)的雷帕霉素,观察MEPCs活性、凋亡、迁移、成骨情况,选择最佳作用浓度.Western blot法观察在此浓度下不同的作用时间(0、3、6、12、24、48 h)自噬标志物LC3Ⅱ和p62/SQSTM1表达水平的变化.结果:6 h内,雷帕霉素促进MEPCs增殖,10 nmol/L雷帕霉素作用效果最明显;而6 h后,雷帕霉素抑制MEPCs增殖,其作用呈时间依赖性,作用时间越长,抑制增殖作用越强.6 h内,雷帕霉素抑制MEPCs凋亡,其中10 nmol/L抑制效果最明显;而6 h后,雷帕霉素促进细胞凋亡.细胞划痕结果表示,雷帕霉素促进MEPCs迁移,作用时间越长、浓度越高,促进迁移作用越强.雷帕霉素处理组抑制MEPCs成骨分化,碱性磷酸酶、茜素红染色及钙离子浓度结果显示,随着成骨诱导时间的延长,抑制作用增强,RT-PCR结果显示成骨相关基因的表达低于对照组.雷帕霉素作用下,随着作用时间的延长,LC3Ⅱ的表达明显增加,p62/SQSTM1的表达与对照组相比明显降低,呈时间依赖性,雷帕霉素促进了自噬.结论:雷帕霉素可能是通过促进自噬影响腭突细胞的生物学特性.