山羊PHLDA2启动子克隆和甲基化分析

摘要

为了研究山羊血小板白细胞C激酶底物同源性样结构域蛋白家族A成员2 (pleckstrin homology-like domain family A member 2, PHLDA2)基因表达水平与其启动子甲基化状态相关性,试验采用RT-PCR方法检测PHLDA2在各组织间的表达水平(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脂肪、舌、大脑、胎盘),以及扩增了山羊PHLDA2基因启动子区域序列,并利用Methylation specific PCR技术检测CpG岛在山羊各组织间的甲基化水平。结果表明:克隆得到的山羊PHLDA2 1842 bp的启动子序列与绵羊、牛PHLDA2启动子同源性分别达93.2%和87.9%;启动区CpG岛内第三位点CpG的甲基化频率和胎盘第一外显子区域甲基化水平显著低于其他组织(P 0.05)。说明PHLDA2的mRNA相对表达量水平与启动子区CpG岛(−302~−88 bp)内第三个CpG位点甲基化频率和第一外显子CpG岛(49~333 bp)甲基化水平呈负相关。