慢性肾功能不全幼鼠胫骨生长板软骨细胞甲状旁腺激素相关蛋白受体低表达对细胞增殖的影响

摘要

目的 观察慢性肾功能不全（CRI）幼鼠胫骨生长板软骨细胞甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrp）受体表达对细胞增殖的影响。方法 雄性2周龄SD幼鼠12只,分为假手术组（暴露左侧输尿管）和CRI组（左侧输尿管结扎）,每组6只。术后2周处死幼鼠,检测血PTHrp浓度,分别提取两组幼鼠胫骨生长板软骨细胞进行体外培养至P3代,检测细胞内PTHrp受体表达情况并应用Western印迹定量分析。5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EDU）技术检测两组细胞24 h增殖率。体外构建PTHrp受体mRNA过表达质粒、空载体、敲低质粒干预CRI组软骨细胞,24 h后观测PTHrp受体mRNA表达并定量分析,48 h后观测PTHrp受体表达并定量分析。EDU技术检测3种质粒干预后细胞24 h增殖率。结果 与假手术组相比,CRI组血PTHrp浓度增高[（1.36±0.42）ng/L比（0.77±0.21）ng/L,t=3.913,P=0.001],Western印迹定量分析结果显示,生长板软骨细胞内PTHrp受体表达减少（0.15±0.07比0.41±0.13,t=5.569,P＆0.001）,24 h细胞增殖率降低[（11.3±3.1）%比（24.6±5.7）%,t=6.482,P＆0.001]。PTHrp受体mRNA过表达后CRI组软骨细胞内PTHrp受体mRNA和蛋白表达均增高,细胞24 h增殖率升高,而敲低组PTHrp受体mRNA和蛋白表达均降低,24 h细胞增殖率减低[过表达组（22.8±6.5）%,空载体组（10.2±4.3）%,敲低组（5.6±2.1）%,F=29.840,P＆0.001]。结论 肾功能不全幼鼠血PTHrp浓度增高,胫骨生长板软骨细胞内PTHrp受体减少,导致PTHrp促细胞增殖作用减弱,细胞增殖率降低。