野生型与Pro370Leu突变型myocilin基因真核细胞表达的对比研究

摘要

目的比较Pro370Leu突变型myocilin（mMYOC）与野生型myocilin（wMYOC）基因在真核细胞中表达的差别,了解原发性开角型青光眼（POAG）的发病机制。方法将携带有wMYOC基因的绿色荧光蛋白重组表达载体pEGFPN3wMYOC和携带有mMYOC基因的红色荧光蛋白重组表达载体pDsRed2N1mMYOC,分别及共同转染真核细胞Hela,用荧光显微镜观察蛋白表达定位情况,并用Western印迹分析蛋白分泌情况。结果荧光显微镜观察到wMYOC蛋白和mMYOC蛋白均成功表达,都定位在细胞质中,但wMYOC蛋白分布均匀,而mMYOC蛋白呈聚集状态。共表达时,wMYOC蛋白也呈聚集状态,且与mMYOC蛋白有共定位倾向。经Western印迹分析,相应的转染细胞可分泌wMYOC蛋白,而不能分泌mMYOC蛋白;当共表达时,也没有wMYOC蛋白分泌。结论两种基因都能成功表达,都定位在细胞质;mMYOC蛋白表现为聚集倾向和分泌障碍,并且影响wMYOC蛋白的表达和分泌特性。