DNA甲基转移酶3b对肝癌细胞系中细胞周期素D1基因的表达和启动子甲基化的影响

摘要

目的探讨DNA甲基转移酶3b（DNMT3b）在人肝癌细胞系（SMMC7721）中对细胞周期素D1（cylin D1）表达及其启动子甲基化水平的影响,并进一步探讨DNMT3b的作用。方法用小分子干扰RNA（siRNA）技术抑制DNMT3b在SMMC7721细胞系中的表达（实验组）,另设转染对照siRNA的对照组,及未加任何处理因素的正常组。用蛋白质印迹检测转染前后DNMT3b及cylin D1蛋白的表达。用噻唑盐（MTT）法检测其生长增殖的变化,并应用甲基化特异性PCR（MSP）技术分别检测实验、对照两组细胞中cylin D1基因启动子区的甲基化状况。结果 DNMT3b siRNA转染组SMMC7721的生存率（53.7%）与对照组、正常组相比明显降低（P=0.01）。蛋白质印迹结果显示DNMT3b表达水平明显低于对照组和正常组,cylin D1蛋白的表达也低于对照组和正常组。两组中cylin D1启动子区甲基化状态无差异,均未发生甲基化。结论 DNMT3b可以调节cyclinDl的表达,而不改变基因的甲基化状态,可能发挥了转录调控因子的作用。