烙灸疗法对大鼠脊髓损伤后神经修复及Wnt信号通路的影响

摘要

目的 基于Wnt信号通路探讨烙灸疗法对大鼠脊髓损伤后神经修复的影响。方法将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、烙灸组、西药组、Wnt抑制剂组和Wnt抑制剂+烙灸组，每组10只。除假手术组外，其余组大鼠采用撞击T9椎板方法建立脊髓损伤模型。烙灸组于建模后24 h在损伤部位局部进行烙灸，1次/d,每次5 min;西药组于建模后0.5 h给予20 mg/kg醋酸泼尼松注射，之后按照4.9 mg/（kg·d）继续干预；Wnt抑制剂组于建模后0.5 h在损伤部位皮下注射40μg/（kg·d）的Wnt通路抑制剂IWR-1;Wnt抑制剂+烙灸组于建模后0.5 h在损伤部位皮下注射40μg/（kg·d）的IWR-1,然后进行烙灸。各组均连续干预28 d。采用BBB运动评定量表和斜板试验评估大鼠运动能力，HE染色观察脊髓组织病理学形态，免疫组化法和Western blot法检测脊髓组织中巢蛋白（Nestin）、黏附连接蛋白（β-catenin）和神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、糖原合成激酶-3（GSK-3β）表达情况。结果 随术后时间延长，除Wnt抑制剂组的BBB评分和斜板角度无明显变化外，其余各造模组大鼠的BBB评分和斜板角度均呈递增趋势；其中烙灸组和西药组大鼠术后第7,14,21,28天的BBB评分均明显高于同期模型组、Wnt抑制剂组、Wnt抑制剂+烙灸组（P均＜0.05）,术后第21,28天的斜板角度均明显高于同期模型组、Wnt抑制剂组、Wnt抑制剂+烙灸组（P均＜0.05）。HE染色显示模型组、Wnt抑制剂组大鼠脊髓严重损伤，细胞坏死，神经元数量明显减少；烙灸组、西药组大鼠脊髓损伤明显轻于模型组、Wnt抑制剂组、Wnt抑制剂+烙灸组。Nestin、β-catenin、GFAP和GSK-3β在脊髓的白质和灰质中都有表达；与假手术组比较，模型组、Wnt抑制剂组和Wnt抑制剂+烙灸组脊髓组织中Nestin和GFAP蛋白表达量均明显升高（P均＜0.05）,β-catenin和GSK-3β蛋白表达量均明显降低（P均＜0.05）;与模型组比较，西药组和烙灸组脊髓组织中Nestin、β-catenin、GSK-3β蛋白表达量均明显升高而GFAP蛋白表达量均明显降低（P均＜0.05）,Wnt抑制剂+烙灸组β-catenin蛋白表达量明显升高（P＜0.05）。结论 烙灸疗法可通过激活Wnt信号通路促进脊髓损伤大鼠神经修复。