建立高分辨熔解曲线技术同时快速检测鸡肉中沙门氏菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和空肠弯曲菌.本研究分别以上述4种菌的fimY、hly、nuc和orfC特异性基因为靶基因,建立能同时检测多种食源性致病菌的多重HRM-real time PCR检测体系,并对反应的特异性、灵敏度、重复性以及在人工染菌样品进行了评价.所建立的HRM-real time PCR检测体系对沙门氏菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和空肠弯曲菌均产生特异性熔解曲线,Tm值分别为82.2°C、78.2°C、75.5°C和73.5°C;多重HRM-real time PCR反应体系检测单一致病菌菌液的灵敏度均为102拷贝数/mL,检测多种致病菌菌液的灵敏度为102拷贝数/mL;该反应体系重复性的试验内CV值在0.03％～0.32％之间,试验间CV值在0.45％～2.12％;人工染菌样本对4种菌的检测限均能达到5 CFU/25 g.结果表明该多重HRM-real time PCR检测体系可对上述4种禽肉中常见致病菌进行有效的检测与区分,特异性强,灵敏度高,反应重复性好,有望在食源性致病菌检测分析中发挥作用.
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