猪圆环病毒3型微滴数字PCR定量检测方法的建立

摘要

猪圆环病毒3型是一种新型猪圆环病毒,可引起猪感染相关疾病.本实验根据猪圆环病毒3型的OPF2基因序列,设计引物探针,建立了可对其准确定量检测的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法.通过对ddPCR反应体系中的引物探针浓度和退火温度进行优化,得到ddPCR反应的最佳引物探针浓度比为800 nM∶800 nM∶400 nM;最佳退火温度为60℃.该ddPCR方法的标准曲线相关系数(R2)为0.999,呈良好的线性关系;灵敏度高,可迭4.4 copies/μL;特异性良好,与常见猪病原无交叉反应.通过对临床样品的检测结果证明,本研究建立的猪圆环病毒3型ddPCR检测方法比实时荧光PCR检测方法的灵敏度高1个数量级,检测结果与荧光PCR定性结果一致,并且可对可疑样本进行定量分析.结果表明:新建立的ddPCR方法灵敏度高、特异性强,可用于猪圆环病毒3型的定量检测.