DNA依赖性蛋白激酶催化亚基在电离辐射诱发HeLa细胞自噬中的作用

摘要

目的了解DNA依赖性蛋白激酶催化亚基（DNA-PKcs）在电离辐射诱发细胞自噬中的作用。方法通过慢病毒载体（p SicoR）构建DNA-PKcs短发夹RNA（shRNA）表达载体,并转染HeLa细胞敲低DNA-PKcs表达。CCK-8实验检测细胞增殖活性及细胞放射敏感性,免疫印迹检测自噬相关蛋白表达,免疫荧光实验检测自噬标志物GFP-LC3的表达。结果成功构建shRNA敲低DNA-PKcs表达的HeLa细胞模型,通过该细胞模型观察到抑制DNA-PKcs蛋白表达导致细胞增殖能力降低、放射敏感性增高。P62和LC3蛋白表达变化,以及细胞内绿色荧光蛋白（GFP）-LC3免疫荧光斑检测结果显示,DNA-PKcs基因敲低后,明显增加X射线诱发细胞自噬。抑制DNA-PKcs导致哺乳动物西罗莫司（雷帕霉素）靶蛋白（mTOR）第2481位丝氨酸磷酸化水平降低。结论抑制DNA-PKcs增强受照射宫颈癌HeLa细胞的自噬及放射敏感性,mTOR信号通路可能参与DNA-PKcs对自噬的调节作用。