Smad4诱导大规模染色质伸展结构域定位

摘要

目的 :了解Smad4能否调节大规模染色质结构改变并对其功能区域进行定位。方法 :将Smad4及其缺失突变体与 pRC lac载体上lac的阻遏物融合并在AO3 1细胞中表达。该细胞株由CHO细胞衍变而来 ,整合有 2 5 6个拷贝串联排列的lac操纵基因。在lac操纵子基因上游含有DHFR基因 ,可用甲氨蝶呤 （MTX）进行基因共扩增。在细胞中lac阻遏物识别和结合lac操纵子基因。用抗lac阻遏物抗体进行免疫组化试验 ,荧光显微镜下观察染色质结构的改变。结果 :野生型Smad4 （1～ 5 5 2aa）有一定的诱导染色质伸展能力 ,且不依赖于TGF β。N端区域 （1～ 15 0aa）、中间连接区域 （130～ 32 5aa）没有诱导大规模染色质伸展活性。C端区域 （2 6 0～ 5 5 2aa）有一定的诱导染色质伸展能力 ,而C端缺失 38个氨基酸残基的区域 （2 6 0～ 5 14aa）能强烈地诱导大规模染色质伸展。结论 :Smad4诱导大规模染色质伸展结构域位于 2 6 0～ 5 14位氨基酸之间 ,C端 38个氨基酸对Smad4诱导大规模染色质伸展有抑制作用。对Smad4诱导大规模染色质伸展活性特性的研究为揭示Smad4在肿瘤发生发展中的作用机制提供了新的途径。