抗基孔肯亚病毒人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建和表达

摘要

目的 :表达具有中和活性的抗基孔肯亚病毒人 鼠嵌合抗体。方法 :用RT PCR法克隆具有中和活性的抗基孔肯亚病毒鼠源单克隆抗体CHIK IF1的轻重链可变区基因 ,克隆人IgG1恒定区基因组基因 ,构建了轻重链嵌合基因和表达质粒pCdhfr1L ,pcDNA3.1H ,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型CHO细胞 ,用ELISA检测培养上清中嵌合抗体的表达 ,MTX加压筛选表达量高的克隆 ,扩大培养收集上清并纯化 ,纯化的嵌合抗体进行SDS PAGE、Western印迹检测和抗原结合活性的检测。结果与结论 :在CHO细胞中成功表达了抗基孔肯亚病毒的嵌合抗体 ,为制备抗基孔肯亚病的被动免疫制剂奠定了良好的基础。