猪血小板膜糖蛋白的纯化与鉴定

摘要

目的 :分离纯化猪血小板膜糖蛋白并对其进行鉴定。方法 :差速离心法分离猪血小板 ,1%TritonX 10 0溶解膜糖蛋白 ,麦胚凝集素亲和层析纯化糖蛋白 （0 .3mol/LN 乙酰葡萄糖胺洗脱 ） ,用鼠抗人GPⅠb单抗PHN89作点印迹 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,考马斯亮蓝 （Coomassieblue ,CB）和过碘酸 Schiff（PAS）染色鉴定糖蛋白 ,腺苷二磷酸钠盐（ADP）和瑞斯托菌素 （ristocetin）诱导的人血小板聚集测定其体外活性。结果 :用GPⅠb单抗PHN89为一抗的点印迹表明 0 .3mol/LN 乙酰葡萄糖胺能充分洗脱结合到凝集素上的GPⅠb。PAS法糖定性有 2条显色条带 ,SDS PAGE纯化后有 2条蛋白区带。ADP阳性对照血小板聚集率为 74 % ,纯化前后的样品血小板聚集率分别为 4 2 %和 4 % ,ristocetin阳性对照血小板聚集率为 10 0 % ,纯化前后的样品血小板聚集率分别为 2 5 %和 3% ,表明制备的血小板糖蛋白具有生物学活性。结论 :得到了较纯的血小板膜糖蛋白 ,为血小板膜糖蛋白的进一步研究及应用奠定基础