逆转录环介导等温扩增技术检测H7N9禽流感病毒基因

摘要

目的 建立检测H7N9禽流感病毒基因的逆转录环介导等温扩增(reverse transcription Loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)方法,并初步评估应用.方法 设计、合成H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因、神经氨酸酶(NA)基因的引物组,通过优化参数,建立RT-LAMP反应体系,使用梯度稀释的标准品测试该体系检测灵敏度,并使用对比毒株测试特异性,再对142份临床标本进行实样检测.结果 成功建立了检测H7N9禽流感病毒HA基因、NA基因的RT-LAMP方法,可直接肉眼观察判读结果,检测其HA基因、NA基因的敏感性分别达到10拷贝每反应、5拷贝每反应,对其他常见呼吸道病原无交叉反应;在测序证实阳性的临床样本中,对于病毒HA基因、NA基因检出率分别为100％、92.68％.结论 逆转录环介导等温扩增技术检测H7N9禽流感病毒基因,具有简单、快速、灵敏度高,检测结果可视化,无需特殊设备等优点,在禽流感病原监测上有一定应用前景.