B19病毒非结构蛋白11 kD对p6启动子和细胞因子启动子的调控作用

摘要

[背景]人细小病毒B19是可以感染并引起人类疾病的两种细小病毒科成员之一.B19病毒的唯一启动子p6负责病毒RNA的转录.研究表明p6启动子活性与其转录因子结合位点以及B19病毒NS1蛋白的调节有关.但是,关于其他重要位点和B19病毒蛋白是否也具有影响p6启动子活性的作用还未有报道.[目的]探究影响p6启动子活性的重要因素,并明确B19病毒11kD蛋白与p6启动子及细胞因子启动子的调控关系.[方法]通过生物信息方法预测分析p6启动子转录结合位点及其CpG位点,利用体外甲基化分析CpG位点对p6启动子活性的影响.同时,利用增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)和荧光素酶报告系统分析影响p6启动子活性的转录因子结合区域以及11kD蛋白对p6启动子和细胞因子启动子的影响.[结果]p6启动子在不同非敏感细胞系中均有较高活性,并且其302-479区段的转录结合位点CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)、阴阳因子(Yin Yang 1,YY1)、信号传导与转录激活因子(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、Sp1/3和E2F转录调节因子7(E2F transcription factor 7,E2F7)对维持启动子活性很重要.同时,p6启动子活性可被其CpG位点的甲基化修饰所抑制,但不被11 kD蛋白所调控.然而11kD蛋白却能显著上调肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白介素6(interleukin 6,IL6)、STAT3启动子的活性.[结论]本研究明晰了B19病毒p6启动子的潜在转录因子结合位点和CpG位点对维持其启动子活性的重要性,并进一步揭示了非结构蛋白11kD与p6启动子以及细胞内因子启动子的关系,推测11kD蛋白可能通过影响细胞内相关因子的表达,进而在B19病毒与细胞相互作用过程中扮演重要角色.