嗜水气单胞菌群体感应信号分子AI-2的细胞外生物合成及活性检测

摘要

[目的]对嗜水气单胞菌群体感应信号分子AI-2进行细胞外生物合成及活性检测.[方法]对LuxS、MtnN-1、MtnN-2蛋白进行氨基酸序列分析、表达及纯化.以S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)为底物,利用纯化的LuxS分别与MtnN-1及MtnN-2蛋白共同作用合成AI-2,并利用哈维氏弧菌报告菌株BB170检测AI-2活性.[结果]嗜水气单胞菌培养液上清中AI-2活性在8h达到空白对照的16.96倍.氨基酸序列分析表明,嗜水气单胞菌与水生病原菌哈维式弧菌和迟钝爱德华氏LuxS一致性达到76％以上,MtnN-1与MtnN-2氨基酸序列一致性为26.37％,其中MtnN-2与哈维氏弧菌和迟钝爱德华氏菌Pfs一致性达到53％以上.成功表达及纯化了LuxS、MtnN-1和MtnN-2蛋白,细胞外LuxS和MtnN-1共同作用合成的AI-2活性是空白对照的45.04倍,LuxS和MtnN-2共同作用合成的AI-2活性是空白对照的63.62倍.[结论]嗜水气单胞菌能够合成信号分子AI-2.MtnN-1和MtnN-2氨基酸序列尽管存在较大差异,但两者均能与LuxS共同催化AI-2的细胞外生物合成.