RCCS模拟微重力对铜绿假单胞菌毒力编码基因和蛋白质谱的影响

摘要

目的探讨三维细胞培养系统（RCCS）模拟微重力环境对铜绿假单胞菌（PA）毒力编码基因表达及菌体蛋白质谱的影响。方法应用RCCS建立PA ATCC 27853模拟微重力培养体系,实验组旋转瓶轴心与地面平行模拟微重力环境,对照组即重力组旋转瓶轴心与地面垂直;采用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测c DNA样本中毒力编码基因外毒素（tox A）、弹性蛋白酶（las B）、鼠李脂糖（rhl A）、绿脓菌素（phza2）mRNA的相对含量;利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术及CM10芯片检测PA菌体蛋白质谱。结果 RCCS模拟微重力处理14 d后,Real-time PCR检测实验组c DNA样本中tox A、las B、rhl A、phza2毒力编码基因相对含量均低于对照组（P〈0.05）;表面增强激光解吸电离飞行时间质谱检测发现有82种小分子菌体蛋白质[荷比在（2-20）×103Da范围内],两组42种菌体蛋白相对含量表达差异有统计学意义,实验组20种蛋白质相对含量表达高于对照组,22种蛋白质相对含量表达低于对照组（P〈0.05）。结论 RCCS模拟微重力培养条件下PA毒力编码基因表达和菌体蛋白质谱发生显著变化。