乙型肝炎、丁型肝炎病毒联合诊断芯片制备的初步研究

摘要

目的制备联合检测乙型肝炎病毒(HBV)、丁型肝炎病毒(HDV)基因芯片并进行杂交验证.方法利用Primer Premier 5.0分别针对HBV、HDV基因保守区域设计多对PCR引物,扩增后的产物克隆至pMD18-T载体,提取阳性克隆质粒进行测序分析鉴定.用PixSys 5500芯片打印仪将PCR产物打印在氨基修饰的玻片上制备成检测芯片.样品荧光标记采用限制性显示(RD)技术,标记后进行杂交验证分析.结果序列分析表明,运用PCR技术得到的多个基因片段均属于HBV、HDV特异基因.杂交结果显示,敏感性、特异性、重复性等指标均佳.结论利用PCR扩增产物作为探针制备HBV、HDV联合诊断芯片是一种快速、简便的实用方法,有着广阔的应用前景;利用RD技术标记样品可提高多种肝炎病毒混合检测的敏感性.