细胞线粒体DNA缺失鉴定的Southern杂交方法的建立

摘要

目的 建立一种简便、快捷、准确检测细胞线粒体DNA缺失的方法 .方法 将线粒体DNA所编码呼吸链中细胞色素氧化酶(COX)的亚单位COX Ⅰ和COX Ⅱ分别作为Southern杂交的分子探针,鉴别细胞株的线粒体DNA是否完全缺失.进行生长营养缺陷鉴定,并从RNA及蛋白水平对结果 进行验证.结果 Southern杂交显示,SK-Hep1细胞可见COX Ⅰ、COXⅡ杂交条带ρ°SK-Hep1细胞(线粒体缺失细胞)未见杂交条带形成,作为对比试验的生长营养缺陷法、PCR、Northern杂交和Western杂交,所得结果 与Southern杂交结果 一致.结论 成功建立了鉴定细胞线粒体DNA缺失的Southern杂交方法 ,该方法 能简便、快捷、准确地鉴定细胞线粒体DNA缺失.