小鼠胚胎毒性试验方法的建立及在评价中药早期胚胎毒性中的应用

摘要

目的 建立一种快速、早期的中药胚胎毒性的快速检测技术,用于中药的早期胚胎毒性筛选.方法 ①血清制备:SD大鼠随机分为阳性对照组4只,正常组4只,雄黄组、朱砂组各3只.阳性对照组给予环磷酰胺10 mg/kg,正常组用0.5％CMC-Na灌胃给药,雄黄组和朱砂组分别将雄黄和朱砂(用0.5％CMC-Na稀释)按1.0 ml/100 g灌胃给药.末次给药后1 h,无菌取血并取上清血清;②细胞采集:4～6周雌性C57小鼠,用妊娠孕马血清(PMSG)腹腔注射,48 h后腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(hCG),合笼交配.第2天检查阴栓,用M2培养液将2细胞胚胎从输卵管中冲出,用M16培养液进行培养;③毒性试验:在胚胎2细胞阶段加入正常组、阳性对照组、雄黄组及朱砂组不同稀释比血清,观察囊胚成活率.结果 在1:4、1:16、1:32的稀释比下,正常组的囊胚率为60.00％、73.33％、93.33％,高于阳性对照组的46.67％、60.00％、66.67％;朱砂组血清各个稀释比的囊胚率均未达到80％;除1:512这个稀释比外,雄黄组血清各个稀释比2细胞胚胎的囊胚率均未达到80％.结论 ①朱砂和雄黄的大鼠含药血清在一定浓度时,对小鼠2细胞胚胎的生长发育有一定的影响,呈现中药的胚胎毒性;②小鼠胚胎2细胞用于中药的早期胚胎毒性筛选方法是可行的.