康氏木霉纤维素酶CBHI基因克隆及在毕赤酵母中的表达研究

摘要

在毕赤酵母中表达康氏木霉(Trichoderma Koningii)纤维素酶基因cbhI.提取经诱导的康氏木霉mRNA,通过反转录及PCR反应扩增纤维素酶cbhI基因cDNA.将cbhI基因克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA上,采用电激法将经Sac I线性化的重组质粒pPICZαA-cbhI转化毕赤酵母GS115,MD及G418抗性平板筛选cbhI基因高拷贝转化子,并用PCR鉴定转化子.BMMY培养基中加入0.5%甲醇对毕赤酵母进行纤维素酶CBHI诱导表达.SDS-PAGE电泳结果显示,表达的重组蛋白相对分子质量约67 kD,pNPC酶活为24.1 U/L,酶蛋白量为0.22 mg/mL,表明,康氏木霉cbhI可以在毕赤酵母中表达,并具有较高活性.