tPA突变体在哺乳动物细胞中的表达

摘要

利用携带有二氢叶酸还原酶(dhfr)基因的pCI载体,实现tPA突变体(FrGGI)在CHO-dhfr-细胞中的高效表达,获得高表达细胞株.采用分子克隆常规技术,将去除3'端非蛋白编码区的tPA突变体cDNA与pCI载体连接,构建真核表达载体pCI-tPA;采用阳离子脂质体转染法转染CHO-dhfr-细胞.经酶切及测序鉴定,证明所构建的质粒正确,转染CHO-dhfr-细胞后,经过MTX加压筛选,得到了10株表达水平较高的细胞株,其活性可达每106细胞4000U/24h.以上结果为进行tPA突变体工程细胞株的筛选奠定了基础.