表达人尿激酶原突变体的重组山羊乳腺特异性表达慢病毒载体的构建

摘要

目的:构建山羊乳腺特异性表达尿激酶原突变体的重组慢病毒载体,证明其表达的有效性.方法:将劳氏肉瘤病毒增强子/启动子、复制缺陷型人免疫缺陷病毒(HIV-1)的5'端长重复序列(LTR)、HIV-1包装信号、HIV Bey反应元件、山羊β-酪蛋白调控序列、尿激酶原M13 cDNA、AU3/3'LTB、牛生长激素(BGH)基因poly(A)依次连接,构建乳腺特异性表达的慢病毒载体.通过体外转染人乳腺癌细胞系MCF-7、中国仓鼠卵巢细胞及泌乳山羊乳腺注射证明其表达有效性.结果:酶切鉴定证实山羊乳腺特异性表达载体构建正确;将该载体转染细胞,采用溶圈法和Western印迹检测证实了其表达的有效性;慢病毒载体注射到泌乳山羊的乳腺,在乳汁中也检测到了尿激酶原的表达.结论:为在转基因动物乳腺中表达尿激酶原突变体奠定了基础.