利用CRISPR/Csa9技术构建溶酶体运输调节因子基因缺陷C57BL/6小鼠

摘要

目的 获得自然杀伤(NK)细胞缺陷的小鼠动物模型,并研究溶酶体运输调节因子(Lyst)基因的功能.方法 采用CRISPR/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠的Lyst基因:针对小鼠Lyst基因编码区第50个外显子,设计CRISPR/Cas9靶点引物(sgRNA),并重组构建pUC57-Lyst-sgRNA载体.将重组质粒体与Cas9质粒分别利用T7 RNA聚合酶体外转录为mRNA,并按比例显微注射入小鼠受精卵,将受精卵移植到受体动物.获得子代小鼠后,利用PCR扩增和测序方法筛选Lyst基因发生改变的动物个体.结果 显微注射移植后获得7只F0代基因敲除小鼠,且毛色均发生了明显的变化.结论 利用CRISPR/Cas9技术可以构建Lyst基因缺陷小鼠,外观表型与已有的文献报道一致.