改良的降落PCR与普通PCR结果比较

摘要

目的 :设计并验证一改良的降落ＰＣＲ(ＭＴＤ ＰＣＲ)程序。方法 :自盐藻ｂａｒｄａｗｉｌ中提取基因组ＤＮＡ作为ＰＣＲ模板 ,使用ＴａｑＤＮＡ聚合酶及ｐｆｕＤＮＡ聚合酶 ,运用普通ＰＣＲ和ＭＴＤ ＰＣＲ程序 ,扩增胡萝卜素生物合成相关基因 (ｃｂｒ)上游启动子序列 ,并电泳比较ＰＣＲ扩增产物的特异性。结果 :使用普通Ｔａｑ酶进行ＰＣＲ ,普通ＰＣＲ程序产生2 0 0ｂｐ , 50 0ｂｐ和 1 2 72ｂｐ的 3条带 ,而ＭＴＤ ＰＣＲ程序仅克隆出 1 2 72ｂｐ的特异带 ;利用高保真的ｐｆｕＤＮＡ聚合酶作ＰＣＲ ,在ＭＴＤ ＰＣＲ泳道中也仅有 1 2 72ｂｐ 1条带 ,而普通ＰＣＲ除了产生 1 2 72ｂｐ的特异带外 ,还出现 1条 50 0ｂｐ的非特异带。结论 :无论使用普通Ｔａｑ酶或高保真酶ｐｆｕ,改良的ＭＴ ＰＣＲ程序均明显提高ＰＣＲ的特异性 ,提示它可用于克隆普通ＰＣＲ难以克隆的基因片段 。