幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白与麦芽糖结合蛋白融合表达产物rMBP-NAP的分离纯化

摘要

目的 :从E .coliTB1(pMAL c2x napA)细菌中分离纯化与麦芽糖结合蛋白融合表达的重组幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白rMBP NAP ,筛选幽门螺杆菌口服疫苗抗原组分。方法 :0 .3mmol/LIPTG在 37℃ ,2 30r/min条件下诱导基因工程菌E .coliTB1(pMAL c2x napA) 3h。 4℃ 4 0 0 0g离心 2 0min收获细胞。过柱缓冲液重悬细胞 ,-2 0℃冻存过夜 ,在冰水浴中超声破碎工程菌 ,4℃ ,90 0 0g离心 30min ,十二烷基磺酸钠 聚炳烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析工程菌中rMBP NAP可溶性 ;低相对分子质量蛋白Marker做标准对照 ,GeneTool测定诱导蛋白相对分子质量。FPLC分子排阻层析法分离rMBP NAP ;SDS PAGE凝胶扫描法测纯化蛋白质的纯度 ,Bradford法检测蛋白质含量。结果 :E .coliTB1(pMAL c2x napA)诱导表达的rMBP NAP主要以可溶性形式存在于超声上清中 ,占上清中蛋白总量的 39.35 % ,相对分子质量约为 5 70 0 0 ,与预期结果一致 ;分子大小排阻层析一步法纯化rMBP NAP纯度可达 91% ,含量可达 0 .12 1g/L。结论 :FPLC分子排阻层析可从大肠工程菌超声菌液中快速纯化rMBP NAP。