TIMP-1绿色荧光蛋白真核表达载体的构建和鉴定

摘要

目的:构建并鉴定TIMP1绿色荧光蛋白真核表达载体。方法:提取胃癌组织总RNA,用TIMP1基因引物进行RT- PCR,将扩增产物克隆至pGEM -T载体,PCR鉴定及测序证实后,BamHⅠ和HindⅢ双酶切pGEM- T- TIMP1重组体,回收TIMP1,再将其亚克隆到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP -C3中,并对阳性克隆进行酶切鉴定和测序分析。结果:构建的pEGFP C3TIMP1表达载体分别作PCR及双酶切鉴定,证实其中有目的片段完整插入,插入片段测序结果与TIMP1序列设计完全一致,将其转染人胃癌BGC823细胞后,TIMP1的表达定位在细胞胞浆内。结论:成功构建了TIMP1绿色荧光蛋白真核表达载体,为TIMP1的肿瘤靶向治疗研究奠定了基础。