肾癌缺氧诱导因子2小干扰RNA表达载体的构建及筛选

摘要

目的:构建肾癌缺氧诱导因子2(HIF-2)小干扰RNA真核表达载体,并研究其对肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白表达的影响。方法:根据GenBank数据库提供的HIF-2基因核苷酸序列,选择设计双链小干扰RNA,合成HIF-2RNAi片段No1、No2、No3和对照片段,将RNAi片段定向克隆于pSilencer2.1-U6neo真核表达载体,转化感受态菌,挑取阳性载体克隆,DNA测序进行鉴定;培养人肾癌786-0细胞,在脂质体的介导下分别将No1、No2、No3和对照片段重组载体转染入人肾癌786-0细胞,并设未转染组,WesternBlot法检测各载体对肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白表达的影响。结果:构建的HIF-2RNAi真核表达载体经DNA测序证实与设计完全一致,转染肾癌786-0细胞24h后,No1组、No2组和No3组HIF-2蛋白表达水平降低(分别为0.05±0.00、0.11±0.01、0.15±0.01),与未转染组(0.22±0.02)和对照组(0.21±0.01)相比,差异有统计学意义(F=83.85,P0.05)。结论:成功构建人肾癌HIF-2RNAi真核细胞表达载体,并可有效干扰肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白的表达。