腺病毒载体左侧反向末端重复区对下游基因表达特异性的影响

摘要

目的:研究腺病毒载体左侧反向末端重复区(ITR)对下游基因表达特异性的影响。方法:采用分子生物学方法及Gateway技术构建正反2个方向含有人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子及GFP报告基因的重组腺病毒载体。以含CMV启动子及GFP报告基因的重组腺病毒载体和不含任何启动子只含GFP报告基因的重组腺病毒载体作对照。重组腺病毒质粒经PacⅠ线性化后用脂质体转染法转染293A细胞,包装并扩增出重组腺病毒颗粒,TCID50测得滴度后分别以相同的感染复数感染4种肿瘤细胞,观察荧光表达情况。结果:携带正向和反向hTERT启动子的重组腺病毒载体在各细胞中荧光表达量无差异,无启动子的重组载体在腺病毒增殖比较强的细胞中有微弱荧光表达。结论:重组腺病毒左侧ITR能够影响上下游特异启动子及其调控基因表达,但对上下游基因的影响程度无明显差异,并且左侧ITR具有类启动子功能。