实时荧光定量PCR定潜伏侵染目目检测山核桃干腐病病菌方法的建立

摘要

由茶麋子葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea引起的山核桃Carya cathayensis干腐病是山核桃栽培过程中的主要病害，该病菌表现明显的“潜伏侵染＂特性。研究山核桃树体中干腐病菌的定量检测技术对山核桃干腐病的预测预报及科学防治具有重要的指导意义。根据茶麋子葡萄座腔菌的EF／α基因设计特异性引物，通过普通聚合酶链式反应（PCR）和实时荧光定量PCR（real-timePCR）扩增发现引物EFRT-F1／R1对山核桃干腐病病菌的特异性及扩增效率较高，可稳定扩增出230bp的目标条带。应用此特异性引物建立的实时荧光定量PCR干腐病病菌检测方法能够定量检测出山核桃植株样品中的病菌含量，灵敏度要比普通PCR高100倍。