培养大鼠海马神经元树突发育的活细胞成像和量化分析

摘要

目的：采用活细胞成像法测量培养海马神经元的树突生长、分支复杂程度和树突丝的运动性，以及定量分析树突树发育的形态学特征。方法：出生后第1天进行海马神经元培养，于第5天转染绿荧光蛋白（GFP）标记的纤维型肌动蛋白（GFP—F—Actin）和定位在膜上的GFP（F—GFP），观察培养第7～14天树突的发育情况并进行量化分析。结果：培养第7～9天可以观察到高密度的树突丝活跃的运动，树突丝的平均密度分别为（10．78±3．78）个／100μm、（10．68±2．96）个／100μm、（9．99±3．67）个／100μm（P〉0．05），有（30．18±14．03）％到（87．36±20．88）％的树突丝运动活跃（P〈0．001）；第7～14天树突树的总长度从（410．74±185．98）μm增长为（1238．21±418．32）μm（P〈0．001），树突树的总分支数从（18．93±7．23）支增加为（33．60±10．46）支（P〈0．001）；培养第14天树突棘的密度为（37．17±6．46）个／100μm。结论：结合荧光蛋白转染和活细胞成像的方法，可动态、连续地观察，并定量分析发育过程中树突丝、树突树和树突棘的形态学特征，是体外观察神经元发育的理想方法。