基于密码子优化策略的厚壳贻贝几丁质酶原核重组表达及功能

摘要

厚壳贻贝mytichitin-1是一种特殊的,可通过裂解方式产生抗菌肽的几丁质酶.对该酶的研究有助于了解贻贝的免疫防御以及几丁质酶的功能多样性机制.为深入研究厚壳贻贝mytichitin-1的结构与功能,采取原核重组表达方式,结合密码子优化策略,获得适于大肠杆菌表达体系的目标基因.通过表达以及表达产物的分离纯化,获得重组mytichitin-1蛋白.经过SDS-PAGE,western blot以及质谱验证,表明重组mytichitin-1序列无误,表达成功,在此基础上,对重组mytichitin-1开展了几丁质催化活性,几丁质结合活性和抑菌活性研究.研究结果表明重组mytichtin-1具有明显的几丁质催化活性和几丁质结合活性;同时重组mytichitin-1表现出对细菌和真菌的抑制活性,且对真菌的抑制活性相对较强.上述研究不仅成功表达出厚壳贻贝mytichitin-1,同时也为后续研究几丁质酶的功能多样性及其分子机制,以及基于厚壳贻贝几丁质酶的蛋白质工程和应用研究奠定了基础.